鲎试剂是什么?
鲎试剂
鲎试剂是由海洋节肢动物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品,含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原,凝固蛋白原,是从栖生于海洋的节肢动物"鲎"的蓝色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和(1,3)-β-葡聚糖。
鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域,用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。
鲎的起源
鲎
鲎是一种奇特的海洋生物。它的祖先在地质历史时期古生代就已出现,随著时间的推移,其他动物都在不断进化或者灭绝,只有鲎,4亿多年来保持著最原始的样貌,所以被人们称为“活化石”。
鲎试剂的分类
鲎试剂分为美洲鲎试剂和东方鲎鲎试剂两大类。一种是由美洲鲎血液提取的称美洲鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate),缩写为LAL,由美国生产;另一种是由东方鲎血液中提取的称东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate),缩写为TAL。TAL与LAL有相同的功效。
鲎试剂的应用
由于鲎试剂对细菌内毒素的特导性反应,所以它不仅用于药品的热原检查,而且也可用于临床和化验室的疾病诊断及卫生学上。
鲎试剂的制备流程
1、将新鲜活鲎洗净,用75%的乙醇消毒,心门采血,加入抗凝剂,在10~15℃制得鲎血;
2、在750~800转/分的速度下将鲎血离心分离,弃蓝色血清,将余下的白色细胞按体积比1∶4加入助悬洗涤剂,处理后,加入细胞破解剂,剧摇至血细胞完全破解,在0Chemicalbook℃下存放获得细胞内溶物;
3、加入体积比为1∶0.8~0.6的CHCl3,在2~5℃下剧摇,在2500转/分~3000转/分的速度下离心分离,收集细胞内溶物即鲎试剂原液,加入增敏剂,预检,再加至敏保护剂,分装,在零下45℃~55℃冻干,即得鲎试剂成品。
鲎试剂的实验方法
凝胶法鲎试剂
细菌内毒素检查法包括两种方法,即凝胶法和光度测定法,后者又包括浊度法和显色基质法。
则鲎试剂可分为:凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂。
凝胶法鲎试剂通过与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂和终点显色法鲎试剂则都是定量检测内毒素的。
鲎试剂的市场前景
由革兰氏阴性菌感染所引起的内毒素血症及脓毒血症目前仍是临床上的主要死亡原因之一。
据文献报道:美国每年约有50万人患脓毒血症,其中约17.5万人因此而死亡,平均死亡率为35%。而在外科病人中的死亡率更可高达40%~70%。传统的革兰氏阴性菌感染诊断方法为细菌培养,不仅需时很长,而且由于抗生素的广泛使用,阳性率很低。而作为临床上抢救感染性休克的关键是在早期的数小时内,因此早期体液中内毒素的正确、快速检测及对症治疗就显得格外重要。鲎试剂准确定量临床生物材料(血液、尿液、腹水、胸水和脑脊液等)的内毒素水平,具有快速(检测时间小于1小时)、灵敏度高(可达0.01EU/ml)、抗干扰能力强和实验成本低等优点,可用于检测原因不明的发热、内毒素血症、败血症、脑膜炎病人体液的内毒素含量,可以作为临床医生诊断病情和判断预后的辅助参考指标,也可作为指导临床治疗、判断疗效和筛选恰当药物的重要辅助手段,避免了目前临床上使用的传统的细菌培养上存在的检出率低、需要时间长的缺点。
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