细菌内毒素(脂多糖)的提取之PCP法、高压超声处理法及DMSO法的介绍
- 分类:新闻资讯
- 作者:
- 来源:
- 发布时间:2022-09-09 09:12
- 访问量:
【概要描述】LPS分子镶嵌于胞壁的外膜中,用某些化学试剂将胞壁裂解(如酚)后,LPS分子从破溃的胞壁中游离出来。由于LPS是一种两性分子,故它们在不同溶剂中的溶解度,完全取决于该分子上的亲水/疏水性基团的多少。S-LPS有完整的亲水性О特异性侧链,所以S型LPS属亲水性分子。
细菌内毒素(脂多糖)的提取之PCP法、高压超声处理法及DMSO法的介绍
【概要描述】LPS分子镶嵌于胞壁的外膜中,用某些化学试剂将胞壁裂解(如酚)后,LPS分子从破溃的胞壁中游离出来。由于LPS是一种两性分子,故它们在不同溶剂中的溶解度,完全取决于该分子上的亲水/疏水性基团的多少。S-LPS有完整的亲水性О特异性侧链,所以S型LPS属亲水性分子。
- 分类:新闻资讯
- 作者:
- 来源:
- 发布时间:2022-09-09 09:12
- 访问量:
一、苯酚╱氯仿╱石油醚法(PCP)
LPS分子镶嵌于胞壁的外膜中,用某些化学试剂将胞壁裂解(如酚)后,LPS分子从破溃的胞壁中游离出来。由于LPS是一种两性分子,故它们在不同溶剂中的溶解度,完全取决于该分子上的亲水/疏水性基团的多少。S-LPS有完整的亲水性О特异性侧链,所以S型LPS属亲水性分子。而R型LPS,缺乏O特异性侧链,含有完整或不完整的核心多糖和完整的类脂A,亲水度不大,而易溶于有机溶剂中,故而R-LPS用酚水法提取时所得的产量极低。
PCP法是以90%苯酚、氯仿及石油醚(40~60℃)以2:5:8所组成的单相混合提取液,这一提取方法只能将LPS及与之紧密结合的透道蛋白(Porin)提取出来,而其它成分则排除在提取液外。PCP法的水沉淀步骤仅能使LPS发生沉淀,而透道蛋白仍溶于苯酚中,故而PCP法所提取的LPS是一种较为纯化的制剂。
PCP法对制取R型细胞的LPS产量十分满意,且无核酸污染,蛋白质含量也仅在0.1~1 %间,该法温和,在室温5~20℃即可完成,制取周期较短,适用于从Ra至Re的细菌,可成功地提取R-LPS,产量也相当高。故PCP法是研究R-LPS的有用方法。应必须注意的是在PCP法中,每一步操作均不应使用盐类,如MgCl2、CaCl2,否则会严重影响产量。
二、高压超声处理法
以某些物理方法(如超声波)处理菌体细胞,使其完全破裂,可增加继后提取方法的完全性,从而可使LPS的产率增加。Richard1983研制了一种既可提取光滑型又可提取粗糙型LPS的新方法。该方法采用了高压处理(15000Ib/in2)细菌的方法,粉碎菌细胞,继又用超声波处理,促进碎片完全裂解,再以DNa s e,RNa s e处理,消化核酸。再加入蛋白酶去消化蛋白质,离心12000xg,浓缩干燥。如此制得的LPS,产量为菌体的51~81%(按测脂肪酸、庚糖和KDO值),蛋白质为0.1%、核酸1 %、脂类2~5%,纯度较高,产量比酚水法高7倍,比PCP法高2倍。
所得LPS经各种免疫化学分析,均提示用此方法提取的LPS其抗原结构完整。其不足之处是碱性条件上的加热,以前认为这一处理在于除掉蛋白质,特别是对于有些细菌(如绿脓杆菌)有用,但对别的细菌恐属多余。应当指出的一点是,碱性加热条件使类脂体A上的脂肪酸酯降解。另外一个不足之处是,此方法较为复杂,不易被一般实验室采用。
三、DMSO法
Adams介绍了一种较为简单的LPS提取方法。该法应用二甲亚砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)作为主要提取试剂。以胞壁原料提制LPS。主要步骤为将预先制取的干燥胞壁以60℃DMSO提取水洗,酸化丙酮处理,冷冻干燥。DMSO法提取的LPS产量是酚水法的10倍,但蛋白质含量很高(45%) 。
免责声明:
本文节选自:《细菌内毒素(脂多糖)提取及其纯化技术》,文章作者:周炳荣。如有侵权,请联系删除,谢谢!
扫二维码用手机看
产品推荐
底部联系方式信息(左)
400-687-1881
公司电话:010-87875910
投诉热线:400-687-1881转8031
公司邮箱:info@bio-life.cn
公司官网:www.acciusa.cn www.bio-life.cn
公司地址:北京市大兴区中关村科技园区大兴生物
医药产业基地华佗路50号院18幢(中国药谷CBP)
关注官方微信
关注手机网站