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一分钟带你了解鲎试剂

一分钟带你了解鲎试剂

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  • 发布时间:2022-11-23 11:05
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【概要描述】  鲎试剂的细胞溶解物是从海洋节肢动物鲎变形细胞溶解物蓝血中提取的生化试剂,低温冻干,它专门用于细菌内毒素检测和真菌(1.3)--D-葡聚糖检测。

一分钟带你了解鲎试剂

【概要描述】  鲎试剂的细胞溶解物是从海洋节肢动物鲎变形细胞溶解物蓝血中提取的生化试剂,低温冻干,它专门用于细菌内毒素检测和真菌(1.3)--D-葡聚糖检测。

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  鲎试剂的细胞溶解物是从海洋节肢动物鲎变形细胞溶解物蓝血中提取的生化试剂,低温冻干,它专门用于细菌内毒素检测和真菌(1,3)-β-D-葡聚糖检测。

 

凝胶法鲎试剂

凝胶法鲎试剂

  鲎试验是世界上检测内毒素的好方法,具有简便、快速、灵敏、准确的特点,因此被欧美药典和中国药典指定为法定内毒素检查法,并被世界各国采用,鲎试剂的细胞溶解物主要产于美国、日本、中国等国家。

  鲎试剂的质量主要表现在灵敏度、自凝时间、成胶状态三个方面:灵敏度稳定;自凝时间不小于24h具有一定的缓冲能力和适宜的pH值;反应后形成固体凝胶,凝胶安瓿可翻转180度而不损坏,而质量差的鲎试剂在存放一定时间(如半年)后,其灵敏度可能会发生变化,灵敏度的变化会改变测定结果所反映的供试品中内毒素的容许限度,因此,必须选择有国家批准文号、质量稳定的鲎试剂。

  鲎试剂按实验方法可分为凝胶法、动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂,都是用来定量检测内毒素的。

  凝胶法是利用鲎试剂与内毒素发生凝集反应的原理,对内毒素进行定性检测或半定量测定的方法,凝胶法是以观察是否形成凝胶作为反应的终点,该方法简单、经济,无需特殊测量设备,可用于定性或半定量测定。

  动态浊度法的特点是:1.精确量化;2.检测范围宽,高时可达4个数量级;3.灵敏度高达0.005EU/ml;4.操作简单,系统自动检测分析,一步到位;5.经济实用,所需试剂样品量少,可减少到50LL ;6.可与微生物检测系统Elx808(支持IU)和专用软件TALgent配合使用,一次最多可检测96个样本。

  终点显色法和动态显色法属于显色矩阵法,显色矩阵法是利用鲎试剂与内毒素反应产生的凝固酶使特定底物显色并释放多少生色团来测定内毒素含量的方法。

  鲎试剂的制备:

  1.将新鲜鲎变形细胞溶解物洗净,用75%乙醇灭菌,心门采血,加入抗凝剂,制成10-15鲎血;

  2.将鲎试剂以750 ~ 800转/分的速度离心,弃去蓝色血清,将剩余的白细胞按14的体积比加入悬液洗涤剂中,处理后加入细胞裂解剂,摇匀至血细胞完全裂解,保存,得细胞内裂解液;

  3.加入体积比为10.8~0.6的CHCl3.2~5摇匀,2.500~3.000rpm离心,收集胞内溶液,即鲎试剂原液,加入敏化剂,预检,再加入敏化剂,在-45~ 55分装。

 

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