什么是内毒素检测?内毒素检测有那些方法?
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- 发布时间:2023-02-21 13:31
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【概要描述】 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的脂多糖和蛋白质的复合物,当细菌死亡或自溶时会释放出来,大量内毒素进入血液会引起发热反应——“热原反应”。内毒素与许多感染性疾病密切相关,疾病的恶化常伴有内毒素含量的升高,疾病的缓解常伴有内毒素含量的降低。因此,内毒素检测可以为临床相关疾病的诊断和预后提供参考。
什么是内毒素检测?内毒素检测有那些方法?
【概要描述】 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的脂多糖和蛋白质的复合物,当细菌死亡或自溶时会释放出来,大量内毒素进入血液会引起发热反应——“热原反应”。内毒素与许多感染性疾病密切相关,疾病的恶化常伴有内毒素含量的升高,疾病的缓解常伴有内毒素含量的降低。因此,内毒素检测可以为临床相关疾病的诊断和预后提供参考。
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细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的脂多糖和蛋白质的复合物,当细菌死亡或自溶时会释放出来,大量内毒素进入血液会引起发热反应——“热原反应”。内毒素与许多感染性疾病密切相关,疾病的恶化常伴有内毒素含量的升高,疾病的缓解常伴有内毒素含量的降低。因此,内毒素检测可以为临床相关疾病的诊断和预后提供参考。
内毒素检测方法有:凝胶法、动态比浊法、终点比浊法、动态比色法和终点比色法。凝胶法系统是利用鲎试剂与内毒素发生凝集反应的原理,对内毒素进行定性或半定量检测的方法。凝胶鲎试剂常见规格为0.1ml/片或0.5ml/片以上,需加热原水(细菌内毒素检查用水)复溶后使用。凝胶法是通过观察是否形成凝胶来判断反应的终点,该方法操作简单、经济,无需特殊测量设备,可用于定性或半定量测定。动态比浊法、终点比浊法、动态显色法和终点显色法都是定量检测内毒素的四种方法。
根据内毒素检测原理,终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中浊度的变化来确定内毒素含量的方法;动态浊度法(也称为动态浊度法)是一种检测反应混合物的浊度上升到预定吸光度所需的反应时间,或检测浊度上升速度的方法。
终点显色法和动态显色法都属于显色矩阵法。显色矩阵法是利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶所释放的发色团的量来测定内毒素含量的方法,也称比色法。今年我国推出以鲎四肽为显色底物的鲎试剂试剂盒,抗干扰能力强,灵敏度高达0.005EU/ml,质量达到国际先进水平。目前已有500多家单位使用了该工具包,部分单位还发布了相应的文件。国内有少数国外产品,但价格远高于国产试剂,而且发货周期长。
如果只需要检测样品的内毒素限值,可以选择凝胶鲎试剂,通过内毒素检测限值和有效稀释倍数,做样品的干扰试验来确定鲎试剂的灵敏度。如果需要定量测定样品中的内毒素含量,应选择显色基质鲎试验试剂盒或动态浊度法鲎试验试剂。
内毒素检测的动态比浊法和动态显色法需要有孵育系统和配套软件的动态光度仪,如ELx808微孔板鲎试验仪和软件TALgent或Gen5。动态浊度法和动态显色法简便、一步到位、线性范围宽,终点显色法需要用酶标仪或可见分光光度计检测。将酶标仪器与孵育系统配合使用,如微孔板鲎试验仪ELx808,可减少试剂消耗。
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