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凝胶法细菌内毒素检查干扰消除的化学方法

  • 分类:新闻资讯
  • 作者:何进
  • 来源:
  • 发布时间:2022-07-18 14:28
  • 访问量:

【概要描述】通常采用三种方法调节鲎试验反应混和液的pH。

凝胶法细菌内毒素检查干扰消除的化学方法

【概要描述】通常采用三种方法调节鲎试验反应混和液的pH。

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一、调节pH

通常采用三种方法调节试验反应混和液的pH

 

①使用高灵敏度的试剂λ为0.06~0.03EU/ml试剂使得检品的最大稀释倍数MVD增大从而减弱或消除检品的pH因素对检查的干扰。

 

②用缓冲液制备样品稀释液使检品的pH达到适合反应的范围这样使用较低灵敏度λ0.25 EU/ml试剂也可以检查这类检品。

 

③用酸碱或缓冲液来调节pH。张毓梅等[1]选取了38个品种pH范围较宽位于2~12之间结果表明pH 4 ~10的供试液由于试剂本身具有一定缓冲能力,因此对检测结果无干扰 pH4pH10的供试液假阴性结果出现的几率比较多但用0. 1 mol/LHClNaOH溶液调整供试液pH6~8用灵敏度λEU/ml试剂进行干扰试验其抑制现象消失。

 

凝胶法细菌内毒素检查干扰消除的化学方法

 

二、调节金属离子

最好的消除因合作用而导致离子不足的方法是计算二价离子需要量然后补充等摩尔无热原的二价离子盐。但常用的方法是通过稀释来消除络合作用。如血液保存液的主要成分是枸橼酸和枸橼酸钠由于枸橼酸根离子对凝胶法有干扰因此王洪等[2]采用稀释法对3种血液保存液进行了干扰试验结果Ⅰ号抗凝液和血液保存液ⅡACD-B稀释44红细胞保存液MAP)稀释22倍后相对应地使用0.125 EU/ml0.25EU/ml试剂,可以排除供试品的干扰。

 

美国FDA试剂检查准则允许使用辅助剂来消除试剂检查的干扰因素。稀释剂Ⅰ)是用于枸橼酸盐类抗凝剂及血液保养液的细菌内毒素检查的一种辅助剂它含有一定浓度的二价离子可以饱和枸橼酸盐的合反应维持试剂的正常灵敏度并有较佳的缓冲能力用本稀释剂Ⅰ)辅助剂作抗凝剂、血液保养液的细菌内毒素检查可以使用常用灵敏度的试剂无需对检品作较高的稀释。

 

喹诺酮类药物结构中34位为羧基和酮炭基,极易和金属离子如钙、铁锌等形成合物导致了TAL灵敏度下降。加适量的 Mg2+稀释剂—Ⅰ),以补充供试品与试剂混合后合的部分来消除干扰作用[3]

 

人免疫球蛋白IVIG对细菌内毒素检查法有强烈的抑制作用单纯用简单稀释和调整pH法无法消除干扰用稀释剂Ⅰ)IVIG4倍以上稀释可以消除其对TAL凝集反应的干扰,可能是IVIG中的球蛋白分子与TAL的二价阳离子结合而稀释剂Ⅰ)含有一定浓度的二价阳离子可维持TAL正常灵敏度所需的二价阳离子并且稀释剂Ⅰ)有较强的 pH 缓冲能力能使反应介质保持反应所需的最佳pH[4]。但要注意二价离子加试剂会增加试剂灵敏度因此调整含有Ca2+ Mg2+等二价盐的药品离子水平时应特别注意避免增强内毒素反应。

 

参考文献:

[1] 张毓梅,代晓静,郑长眷,.供试品溶液的pH对细菌内毒素检查法结果的影响[J].中国药学杂志.2007,42(8):621-623

[2] 王洪,王欣,张晓寒,.BET法检测3种血液保存液细菌内毒素的效果观察[J].中国输血杂志,2007,20(1):49-50

[3] 韦群,粱丹,陈瑜.喹诺酮类注射液细菌内毒索检查方法的研究[J].广东药学院学报.2004,20(1):24-27

[4] 郭采平,张剑平,黄晓华.静注入免疫球蛋白细菌内毒索检查方法的建立[J].中国生物工程杂志,2004,24(5):84-86 [J].

 

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本文节选自:《凝胶法细菌内毒素检查的干扰因素及消除》,文章作者:何进。如有侵权,请联系删除,谢谢!

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发布时间:2022-01-27 11:34:07

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