生物制品中内毒素祛除方法应根据蛋白的生产工艺来选择。因为每种蛋白的生产工艺不同，所以没有通用的祛除蛋白质内毒素的方法。如阴离子交换柱常用来去除正电荷蛋白的污染，比如尿激酶等^[1]。然而对于一些带负电荷的蛋白产品来说则应选用其他方法，因为这种方法会有吸附作用使产品丢失。对于一些小分子蛋白，比如肌红蛋白（相对分子质量18000)可采用超滤法，但效率不高。而且，如果内毒素与蛋白相互作用会引起内毒素单体被膜吸附，使超滤法亦不能采用。

因为内毒素对热和pH变化不敏感，因此在蛋白纯化的下游工艺中，内毒素的祛除成为非常重要的技术之一。如果是易变的生物分子，如蛋白质等，内毒素的祛除更具有挑战性。在蛋白质制备过程中有许多方法可以选用，包括离子交换色谱﹑硅胶吸附色谱，固定组氨酸、多聚-L-赖氨酸、多粘菌素B等的亲和吸附法，凝胶过滤色谱﹑超滤﹑蔗糖梯度离心、Tritonx-114相分离等。应根据目的蛋白的特性来选择从蛋白中分离祛除脂多糖的方法。无论选择何种方法，2种非常重要的因素影响其成功：一是内毒素与蛋白抗原复合物对色谱介质的亲和力；另一是内毒素对蛋白抗原的亲和力。此外，内毒素与结合蛋白的亲和力还要受浓度﹑pH值清洁剂溶剂和变性剂等方面的影响。

通常，内毒素的祛除方法往往在选择性﹑吸附能力和蛋白回收率方面还存在不少的问题。在不含蛋白质的溶液中，根据内毒素和溶液的分子大小采用不同孔径大小进行超滤，或者是采用疏水性非选择性吸附，或离子交换可轻松选择祛除内毒素。对于在含蛋白的溶液中选择性祛除内毒素，必须要了解内毒素在溶液中的存在形式。

Hiragama等^[2]认为内毒素聚集物通过其类脂A磷酸集团形成头部，成为一负电荷的大分子。此特征充分说明在阳离子吸附剂和内毒素磷酸基团结合过程中，离子间相互作用扮演了重要角色。当在蛋白溶液中选用疏水性吸附剂时，表明同样存在吸附剂与内毒素脂质基团的疏水结合，这些结合力取决于蛋白的特点（净电荷﹑疏水性）以及溶液的条件(（pH和离子强度等）。

参考文献：

[1] 中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[S].第1辑.1993:207-208.

[2] 南登崑.康复医学[M].第2版.北京:人民卫生出版社,2001:244.

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本文节选自：《生物制品内毒素的祛除方法研究进展》，文章作者：程春雷，高天勤。如有侵权，请联系删除，谢谢！