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鲎血变形细胞裂解物的材料与制备

鲎血变形细胞裂解物的材料与制备

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  • 发布时间:2023-10-11 16:32
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【概要描述】我们了解到,鲎血液中含有一种细胞即变形细胞,这种细胞内的溶解物(裂解物tachypleus lysate,TL)可与微量细菌内毒素起凝集反应,这是由TL中的一种酶被细菌(革兰阴性菌)细胞壁成分——脂多糖激活,使其蛋白质形成凝胶所致。为此人们已阐明了这方面的理论机制,并已着手利用各种技术从自然界存在的某些物质中把它提取出来,实践并应用于社会,鲎变形细胞内的溶解物主要有两种,凝固蛋白原及凝固蛋白酶原。这两种物质提取后,即为检测内毒素的益试剂,它的检测灵敏度高低取决于制备擞血细胞溶解物的质量。因此,在制备提取过程中不能有微量的内毒素进入,所以,鲎试剂的制备提取过程是有相当难度的。

鲎血变形细胞裂解物的材料与制备

【概要描述】我们了解到,鲎血液中含有一种细胞即变形细胞,这种细胞内的溶解物(裂解物tachypleus lysate,TL)可与微量细菌内毒素起凝集反应,这是由TL中的一种酶被细菌(革兰阴性菌)细胞壁成分——脂多糖激活,使其蛋白质形成凝胶所致。为此人们已阐明了这方面的理论机制,并已着手利用各种技术从自然界存在的某些物质中把它提取出来,实践并应用于社会,鲎变形细胞内的溶解物主要有两种,凝固蛋白原及凝固蛋白酶原。这两种物质提取后,即为检测内毒素的益试剂,它的检测灵敏度高低取决于制备擞血细胞溶解物的质量。因此,在制备提取过程中不能有微量的内毒素进入,所以,鲎试剂的制备提取过程是有相当难度的。

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我们了解到,鲎血液中含有一种细胞即变形细胞,这种细胞内的溶解物(裂解物tachypleus lysateTL)可与微量细菌内毒素起凝集反应,这是由TL中的一种酶被细菌(革兰阴性菌)细胞壁成分——脂多糖激活,使其蛋白质形成凝胶所致。为此人们已阐明了这方面的理论机制,并已着手利用各种技术从自然界存在的某些物质中把它提取出来,实践并应用于社会,鲎变形细胞内的溶解物主要有两种,凝固蛋白原及凝固蛋白酶原。这两种物质提取后,即为检测内毒素的益试剂,它的检测灵敏度高低取决于制备擞血细胞溶解物的质量。因此,在制备提取过程中不能有微量的内毒素进入,所以,鲎试剂的制备提取过程是有相当难度的。

鲎血变形细胞裂解物的材料与制备

一、材料与制备

1、鲎

采用我国东南沿海地区的鲎即东方鲎(中国鲎),采血量最多为400ml,平均200ml(需根据体重大小而定),其变形细胞数最高为5×1011/L以上,平均为4×1010/L

2、器材及处理

准备采血瓶(250ml玻璃瓶)注射器等用具,经洗涤后放在重铬酸钾与硫酸的清洁液中浸泡过夜,然后用无内毒素的流水冲洗3次,晾干后于260℃烤箱内烘干3h备用。采血针、管均需用一次性无菌采血器(均无内毒素)。

3、试剂配制

以下试剂中凡是固体试剂均需预先去除内毒素,去内毒素的方法要视各种试剂的耐热度而定,一般用80~120℃不间断烘烤约10h左右。配制试剂用的重蒸馏水应不含内毒素(小于0.03EU/ml内毒素含量)。

  1. 抗凝剂1:茶碱(theophylline2g;磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O2g;氯化钠40g;无内毒素蒸馏水1000ml
  2. 抗凝剂2:茶碱0.36g;磷酸氢二钠2g;氯化钠4g;无内毒素蒸馏水1000ml

3)洗涤液:磷酸氢二钠2g;氯化钠40g;无内毒素蒸馏水1000ml

4)裂解液:将0.05mol/L的三羟甲基氨基甲烷(Tris)用盐酸调节至pH值为7左右,也可加入二价阳离子如Ca2+Mg2+Mn2+等提高灵敏度。

 

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