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鲎血变形细胞裂解物的制备步骤

鲎血变形细胞裂解物的制备步骤

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  • 发布时间:2023-10-12 16:22
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【概要描述】取活鲎用水冲洗,将鲎屈曲,露出头、胸、腹三节交界处,用碘酒擦拭后用酒精消毒。取15G针头一次性输血器,针尖插入盛有100ml抗凝剂1的瓶中,另一端的针头刺入鲎的头腹部关节处深入约1~2cm,蓝色血液就流入瓶内,每瓶采血100ml,注意稳定针头,使其不要移动。在采血过程中,鲎血应是顺畅地流入瓶中,若发生间歇滴入就容易凝固,应即弃去不用。采血后立即用1000r/min离心约2min。离心后,变形细胞沉积于瓶底,呈白色,此时弃去上层蓝色血液即可。

鲎血变形细胞裂解物的制备步骤

【概要描述】取活鲎用水冲洗,将鲎屈曲,露出头、胸、腹三节交界处,用碘酒擦拭后用酒精消毒。取15G针头一次性输血器,针尖插入盛有100ml抗凝剂1的瓶中,另一端的针头刺入鲎的头腹部关节处深入约1~2cm,蓝色血液就流入瓶内,每瓶采血100ml,注意稳定针头,使其不要移动。在采血过程中,鲎血应是顺畅地流入瓶中,若发生间歇滴入就容易凝固,应即弃去不用。采血后立即用1000r/min离心约2min。离心后,变形细胞沉积于瓶底,呈白色,此时弃去上层蓝色血液即可。

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详情

1、采血

取活鲎用水冲洗,将鲎屈曲,露出头、胸、腹三节交界处,用碘酒擦拭后用酒精消毒。取15G针头一次性输血器,针尖插入盛有100ml抗凝剂1的瓶中,另一端的针头刺入鲎的头腹部关节处深入约12cm,蓝色血液就流入瓶内,每瓶采血100ml,注意稳定针头,使其不要移动。在采血过程中,鲎血应是顺畅地流入瓶中,若发生间歇滴入就容易凝固,应即弃去不用。采血后立即用1000r/min离心约2min。离心后,变形细胞沉积于瓶底,呈白色,此时弃去上层蓝色血液即可。

鲎血变形细胞裂解物的制备步骤

2、洗涤

用抗凝剂2-20ml加入瓶中轻轻摇晃,使沉淀的变形细胞均匀地分散混悬于抗凝剂中,然后以1000r/min离心1min。弃去上清液后用4%氯化钠磷酸盐溶液洗涤3次,之后再次离心约1500r/min 1min,将细胞压实,弃去上清液。

3、裂解

将压实的变形细胞加入约3倍裂解液后使细胞计数在5×1011/L,变形细胞100ml沉淀物加裂解液10ml。然后放置于4℃的冰箱内,每天震荡2次,以使细胞裂解完全。析出的液体应透明无色。

4、分装冻干

将裂解物以3000r/min离心15min,收集上清液分装于安瓻中,放置于医用冷冻干燥机中,-30℃快速冷冻,然后于真空状态下升温干燥,升温不超过20℃。冷冻干燥后即可得到标准灵敏度的鲎试剂成品。

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