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鲎试验的操作程序介绍

鲎试验的操作程序介绍

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  • 发布时间:2023-10-19 16:00
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【概要描述】鲎试验必须严格避免内毒素的污染,所用的玻璃器材要以优质洗涤剂认真洗净后再用无热原蒸馏水洗涤数次后进行240℃30min或200℃2h干热灭菌,对有机玻璃则用环氧乙烷灭菌;鲎试验所用的液体必须用双重无热原的蒸馏水或灭菌注射用水,且抗凝血试管需涂上硅油。

鲎试验的操作程序介绍

【概要描述】鲎试验必须严格避免内毒素的污染,所用的玻璃器材要以优质洗涤剂认真洗净后再用无热原蒸馏水洗涤数次后进行240℃30min或200℃2h干热灭菌,对有机玻璃则用环氧乙烷灭菌;鲎试验所用的液体必须用双重无热原的蒸馏水或灭菌注射用水,且抗凝血试管需涂上硅油。

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1、准备

鲎试验必须严格避免内毒素的污染,所用的玻璃器材要以优质洗涤剂认真洗净后再用无热原蒸馏水洗涤数次后进行24030min2002h干热灭菌,对有机玻璃则用环氧乙烷灭菌;鲎试验所用的液体必须用双重无热原的蒸馏水或灭菌注射用水,且抗凝血试管需涂上硅油。

鲎试验的操作程序介绍

2、试剂

1)样品试管应涂上硅油灭菌,内含肝素抗凝剂,肝素浓度为8×105U/L,每管加1~2滴即可。

20.1%溴酚蓝呈色液(bromophenol blue):用0.1g溴酚蓝加95%的乙醇溶液20ml,溶解后加80ml磷酸缓冲液(pH7.4)。

3)稀释缓冲液:0.05mol/LTris-HCL缓冲液,pH7.2,内含0.04mol/LMgCl2溶液。

4)鲎试剂。

3、除去血浆干扰物质(血浆预处理)

血浆中含有较强的阻碍凝胶形成的物质,其机制不明。已知抗凝血酶Ⅲ、α2纤维蛋白溶解酶能抑制凝固酶的作用,故测定血液中内毒素时必须将有干扰的物质去除﹐目前去除干扰物质的方法有氯仿法、酸化法、加热法、乙醚加热法和硫酸铵法。这些方法中最常用的是氯仿法和加热法。

1)氯仿血浆干扰物质去除法(氯仿法):将肝素抗凝血4ml以低速(800r/min)离心10min,取上层血浆1ml,加氯仿0.25ml0.5ml于密封磨口玻璃管中,在室温下振荡1h,振荡后以3000r/min离心15min,即可见管中液体分为三层,吸取中层混浊液体进行内毒素检测。

2)加热血浆干扰物质去除法(加热法):将肝素抗凝血1ml以低速离心,取上层血浆0.1ml,加灭菌蒸馏水0.2ml(不可用生理盐水)放于100℃水浴中隔水加热10min,取出冷却后,见液体稍有乳浊时即可用试管法、玻片法进行内毒素检测.根据作者的经验,加热法效果较佳,且方法简便、节省时间。

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