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内毒素与鲎试剂的反应原理

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  • 发布时间:2022-08-04 13:46
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【概要描述】内毒素检测LT法(鲎变形细胞溶解物试验)的机理即是内毒素通过激活C因子、B因子、前凝固酶,而使可凝固蛋白变成凝固蛋白(肉眼可见的凝胶),从而可以半定量及定量地测知内毒素的含量。

内毒素与鲎试剂的反应原理

【概要描述】内毒素检测LT法(鲎变形细胞溶解物试验)的机理即是内毒素通过激活C因子、B因子、前凝固酶,而使可凝固蛋白变成凝固蛋白(肉眼可见的凝胶),从而可以半定量及定量地测知内毒素的含量。

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系海产动物生物学分类上属节肢动物门肢口纲剑尾目。在其血液中含有一种特殊的变形细胞amoebocyte。这种变形细胞中含有能被内毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白因此内毒素检测LT鲎变形细胞溶解物试验的机理即是内毒素通过激活C因子、B因子、前凝固酶而使可凝固蛋白变成凝固蛋白肉眼可见的凝胶),从而可以半定量及定量地知内毒素的含量(图1

 

内毒素与鲎试剂的反应原理

 

日本学者在对可凝固蛋白氨基酸顺序研究的基础上发现内毒素激活的凝固酶的作用点为可凝固蛋白的第18Arg19Ghr间的肽健以及第46Arg47 G1y间的肽键而裂解为A链、B链及C肽。且在切断部位的羧基端氨基酸的结构均为-G1y-Arg提出此酶的作用有特异性2。产色基质内毒素检测法即是据此原理而设计的。

 

内毒素与鲎试剂的反应原理

 

一般地讲内毒素与试剂的反应是非常特异的因此LT法的假阳性极少。从革法兰氏阳性菌分离出的肽聚糖虽亦能凝固鲎试剂但其活性比内毒素低1000~ 400000倍。

 

近来发现一种新的合成抗癌剂羧甲基13-β-D-葡聚糖亦能与鲎试剂起反应。其反应原理是:鲎试剂中含有一种称为G因子的物质此抗癌剂能激活试剂中的G因子而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白从而形成凝胶2。至此凝血酶、凝血激酶Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等亦可凝固鲎试剂而引起假阳反应。但用氯仿处理此等物质(浸取34小时可以除去这些物质从而可避免发生假阳性反应。

 

哺乳类动物血浆中含一种酯酶它对内毒素有降解及脱毒的作用故用LT法检测血浆中的内毒素易受此种物质的影响而造成假阴性结果。为了避免此等因素的影响在试验前血浆需经过特殊处理。目前共有下述四种方法处理血浆即稀释加热法、酸化值液、氯仿浸取法及凝胶过滤法。我们及其它的一些工作者认为稀释加热法简便易行效果较好。

 

血液中还有一种称之为抗LPS因子Anti - LPS - factorALF的蛋白物质分子量约为15KDa为一种血抗凝剂LPS介导的LT反应有直接的抑制作用。ALF可抑制LPSLT反应的初始.阶段。因此在制备试剂时应将此物质清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ o.o2M可改善试剂的质量提高敏感性约100倍。

 

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本文节选自:《内毒素的检测与鲎实验(一)》,文章作者:余庆。如有侵权,请联系删除,谢谢!

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发布时间:2022-01-27 11:34:07

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