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内毒素的分离提取方法介绍

内毒素的分离提取方法介绍

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  • 发布时间:2024-01-11 13:31
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【概要描述】Boivin和Messrobeanu于1935年,将活菌或经冷冻干燥的大肠杆菌,在4℃条件下与0.25N的三氯醋酸共同振荡或剧烈搅拌,将细菌细胞裂解,使LPS分子从破溃的细胞外膜上游离出来。离心后取上清液经浓缩后,加2倍体积的冷冻乙醇,将生成的沉淀物溶解、浓缩后冷冻干燥,即得到LPS干粉。此法提取的LPS含有10%左右的菌体蛋白,这些蛋白质可影响LPS的理化性质和生物学活性。

内毒素的分离提取方法介绍

【概要描述】Boivin和Messrobeanu于1935年,将活菌或经冷冻干燥的大肠杆菌,在4℃条件下与0.25N的三氯醋酸共同振荡或剧烈搅拌,将细菌细胞裂解,使LPS分子从破溃的细胞外膜上游离出来。离心后取上清液经浓缩后,加2倍体积的冷冻乙醇,将生成的沉淀物溶解、浓缩后冷冻干燥,即得到LPS干粉。此法提取的LPS含有10%左右的菌体蛋白,这些蛋白质可影响LPS的理化性质和生物学活性。

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20世纪30年代至今根据内毒素的理化性质而设计的分离、鉴定内毒素的技术方法主要有下述几种

(一)三氯醋酸法

BoivinMessrobeanu1935将活菌或经冷冻干燥的大肠杆菌4℃条件下与0.25N的三氯醋酸共同振荡或剧烈搅拌,将细菌细胞裂解使LPS分子从破溃的细胞外膜上游离出来。离心后取上清液经浓缩后2倍体积的冷冻乙醇将生成的沉淀物溶解、浓缩后冷冻干燥即得到LPS干粉。此法提取的LPS含有10%左右的菌体蛋白,这些蛋白质可影响LPS的理化性质和生物学活性。

内毒素的分离提取方法介绍

(二)-水法

wesphalluederitz1952年为分离含蛋白质较低的LPS而建立的方法以后被广泛应用于水溶性S-LPS的提取。具体过程为在细菌的水溶液中,加入等量90%的酚将细胞裂解使内毒素分子从破溃的细胞外膜上游离出来。68℃,振荡1015min冷却、离心收集富含LPS的水相并反复用水萃取35然后将水相浓缩、冷冻于燥得到粗提的LPS将粗制品溶解于水,高速离心100000g23h),得到颗粒状LPS后再溶于水中冷冻干燥。此法提取的LPS纯度较高蛋白质含量为1%~3%

(三)-氯仿-石油醚法

Galanos设计的提取R-LPS的方法。预先经乙醇、丙酮、乙醚脱脂后的干燥菌90%苯酚﹑氯仿及石油醚按2∶5∶8所组成的混合提取液提取23取酚相得到LPS和孔蛋白porin提取液用减压法去除溶媒加水形成沉淀并洗涤35然后再用80%苯酚复溶减压干燥得到的LPS粗制品溶于水超速离心取沉淀即得到LPS纯品。此法纯化得到的LPS不含核酸和多聚糖蛋白质含量可控制在1%以下。

(四)-丁醇法

Morrison等于1975年设计。水-丁醇法较酚法简便温和适用于提取大肠杆菌和沙门菌的LPS所得制品含蛋白量约1%。但此方法仍存在一些不足由于丁醇不能灭活制品中酶类导致在制备过程和储存时,Lipid A常发生降解。

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发布时间:2022-01-27 11:34:07

 

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