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内毒素的纯化方法有哪些?

内毒素的纯化方法有哪些?

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  • 发布时间:2024-01-11 13:39
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【概要描述】由于提取的LPS中含有较多带正电荷的杂质,因此在LPS的电透析过程中可发现阴极的pH值升高,阳极的pH值变化不明显的现象。电透析过程中LPS溶液的pH值常有一定程度的下降,同时由于有稳定LPS多聚体功能的Mg2+ 、Ca2+等离子成分被除去,LPS多聚体变为单体而发生沉淀。

内毒素的纯化方法有哪些?

【概要描述】由于提取的LPS中含有较多带正电荷的杂质,因此在LPS的电透析过程中可发现阴极的pH值升高,阳极的pH值变化不明显的现象。电透析过程中LPS溶液的pH值常有一定程度的下降,同时由于有稳定LPS多聚体功能的Mg2+ 、Ca2+等离子成分被除去,LPS多聚体变为单体而发生沉淀。

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(一)离子交换层析法

利用阳离子树脂非特异性的吸附带负电荷LPS的性质LPS从流动相中分离纯化出来。

(二)亲和层析法

利用多粘菌素B特异性结合LPS的特性将多粘菌素B包被于聚丙烯胺树脂等高分子聚合物的表面制成特异性结合LPS的层析柱即可对LPS进行亲和层析法纯化。

(三)金属离子和小分子量多胺成分的去除

通常情况下未提纯的LPS溶液中存在大量的小分子带电物质Mg2+ Ca2+和少量的Fe2+ A13+Zn2+Na+等离子及乙醇胺、腐胺﹑精胺、亚精胺及尸胺等小分子量多胺。它们中和LPS分子上带负电荷的磷酸基团使得本可以用带电荷的吸附剂将LPS除去的效果明显降低。电透析便是通过离子交换的方法进行LPS纯化的。其原理就是将很多的阴/阳离子交换膜交错地串联在一起电解质溶液则在膜间流动两侧施加直流电之后溶液中阳离子如无机阳离子、生物碱等向阴极移动而阴离子如无机阴离子、有机酸等向阳极移动。其中阴离子可顺利通过阴离子膜但再往前移动时却被邻近的阳离子膜挡住。同样阳离子也可以顺利地通过阳离子膜而无法通过阴离子膜。中性化合物及高分子化合物则留在透析液中最终得到纯化的提取物2-6)。

内毒素的纯化方法有哪些?

由于提取的LPS中含有较多带正电荷的杂质因此在LPS的电透析过程中可发现阴极的pH值升高阳极的pH值变化不明显的现象。电透析过程中LPS溶液pH值常有一定程度的下降同时由于有稳定LPS多聚体功能的Mg2+ Ca2+等离子成分被除去LPS多聚体变为单体而发生沉淀。为避免此现象,需用NaOH或三乙胺将其中和到pH 7.0左右使其形成中性的、高水溶性的LPS钠盐和LPS三乙胺盐而重新溶解。电透析结束时LPS一般为酸性产物此酸性LPS在水中的溶解度极低可直接进行冻干处理,-4-20℃低温保存每次使用前可用不同的碱中和转化成所需要的LPS盐。

(四)核酸成分的去除

根据LPS与核酸片段在分子量上的差异可用超速离心法、电泳法等方法将其去除。

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