1、根据样品的细菌内毒素限度来检测鲎试剂的敏感性是不是最好的选择？

10%葡萄糖注射液使用0.50EU/ml的鲎变形细胞裂解物，注射用水使用0.25EU/ml的鲎变形细胞裂解物。

鲎试剂的灵敏度值等于样品溶液中细菌内毒素的限度。从一般的角度来看，鲎试剂唯一的优点就是可以节省样品的稀释度。但有两个缺点：1）由于溶质浓度和PH值的影响，增加了PPC管操作的难度；2）难免有样品溶液中残留的滤材，或不可预料的管道溶解等因素造成PPC管不结露，导致测试无效，结果是“最佳处方”。反之，造成时间、试剂、药品等的浪费，耽误工作。做过细菌内毒素检测的同志都知道，双倍稀释法是制作检测样品阳性对照（PPC）管最简单、最规范的方法。因此，为降低样品溶液对细菌内毒素检测的干扰，建议选择灵敏度更高的鲎试剂如0.125EU/ml，并适当稀释样品溶液。

2、细菌内毒素检测的取样/检测数量是多少？

除另有规定外，内毒素检验样品一般按随机抽样的原则进行取样。在随机抽样中，应特别注意批次。一个制剂批中有多个灭菌柜/批次时，应分别对每个灭菌柜/批次进行内毒素检测。

在内毒素检测中，同一批样品不同瓶用同一厂家的同一批鲎试剂进行检测，即使更换更换鲎试剂也可重复出现不同的结果。排除污染可能性后，测定样品的细菌内毒素污染情况。结果发现，两个大输液瓶的细菌内毒素污染程度相差四倍以上。由此可见，瓶子之间细菌内毒素污染的差异是客观存在的。这一现象也提醒我们，内毒素检测由于抽样原理，无法有效检测出污染概率低的缺陷。按照随机抽样的原则，

3、细菌内毒素检测对水的要求

细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准，其内毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝胶法）或小于0.005EU/ml（用于光度测定法），且对内毒素试验无干扰作用。

4、细菌内毒素检测水与灭菌注射用水有以下区别：

内毒素含量：灭菌注射用水要求低于0.25EU/ml，细菌内毒素的内毒素检测无论是凝胶法还是定量法都可以忽略不计，但注射用无菌水由于其内毒素标准较低，内毒素也不容忽视。鲎试验使用灭菌注射用水。灭菌注射用水与样品中的内毒素叠加，可能导致假阳性结果，给企业带来不必要的经济损失。

PH值：灭菌注射用水PH值应为5.0-7.0，细菌内毒素试验PH值应为6.0-8.0。细菌内毒素检测水PH值6.0-8.0更有利于细菌内毒素与鲎试剂的反应。

无干扰性：细菌内毒素检验用水要求对内毒素检验无干扰作用，而无菌注射用水无此标准要求。灭菌注射用水可能会被抑制，导致假阴性结果。有时内毒素超标，检不出。漏检引起的输液反应可能会给企业带来灾难。

5、注射用水细菌内毒素检验是否需要每批次做阳性对照？

供体的作用是验证样品中是否存在抑制鲎试剂凝固的物质，从而证明样品溶液的结果是准确的。注射用水是生产注射用药物的溶剂。必须保证注射用水内毒素检测结果的准确性和可靠性。如果不做阳性对照试验，一旦出现假阴性，就无法预测成品中的内毒素是否合格。成品中仍未发现假阴性产品。不合格产品流入市场会引起严重的输液反应，直接威胁临床患者的生命安全。

6、细菌内毒素产品用水稀释检验后，实验的剩余部分能否保存重复使用？

稀释后的内毒素溶液应还原10分钟以上。使用前，应将内毒素溶液在涡旋混合器上重新摇动 1 分钟。超过4小时后应丢弃内毒素溶液。稀释后的内毒素溶液效价较低，通常长期贮存后效价下降。因此，再次使用时，实验结果可能会出现偏差。通常，内毒素工作产品价格低廉，不建议在保存后重复使用。

7、如何保证细菌内毒素检测结果的准确性

要保证细菌内毒素检测结果的准确性，应做好三个方面的工作：第一，保证检测设备的可靠性，否则实验将100%失败；第二，确保标准稀释度准确，以确保实验结果的准确性；第三，准确加样，这是实验的基础，没有这个基础，实验的准确性、药典规定、SOP等都无从谈起。

细菌内毒素检测关系到人的生命安全。药典和SOP对其实验过程都有严格的规定。每位从业人员都应认真阅读，深入理解，透彻理解鲎试验的反应原理和影响因素，解决实验中的问题，确保实验结果的准确性，确保用药安全。

8、凝胶法的必备材料

1.TAL（鲎变形细胞裂解物）；

2.细菌内毒素检测水：要求其pH值在5.0～7.0之间，内毒素含量小于0.003EU/ml；

3.细菌内毒素类产品：活性单位：50-200EU/支进行灵敏度标定；活性单位：2-20 EU/分支用于阳性对照；

4.无热原抽吸（250ml/支、1000ml/支）和无热原玻璃管（2ml、5ml）；

5.用于稀释内毒素和放置TAL试剂的TAL试管架可用于水浴恒温；

6.涡旋振荡器；

7.恒温或水浴；

8.医用胶带、封口膜、精密可调移液器等详见产品说明书；

9.其他，如砂轮、剪刀、酒精棉球等。