什么是鲎试剂？

鲎试剂来源于活化石“鲎”的蓝色血液，用于检测注射药品、生物制品、疫苗、医疗器械、透析相关用品中的细菌内毒素(热原)和真菌(1,3)-β-D-葡聚糖含量，是当今医药行业产品安全的重要保障，在临床上可用于侵袭性真菌感染和革兰氏阴性菌感染的早期诊断。由于我国是医药工业的大国，中国药典每5年就增加收载一批细菌内毒素检查品种。《中国药典》(2000年版)规定细菌内毒素检查项的品种只有69种，到2005年版《中国药典》则规定168个品种进行细菌内毒素检查法，并收录了凝胶法和光度测定法2种细菌内毒素检查法。2015年12月发布的《中国药典》Chemicalbook(2015年版)二部中需进行内毒素检查的药品有528种，三部中需进行细菌内毒素检查(通则1143)有54个品种。常用的热原检测方法主要是家兔法和细菌内毒素检测法(鲎试剂)，随着生物技术的发展，鲎试验逐渐替代家兔热原试验。随着我国医药行业的不断发展，需要使用鲎试剂进行细菌内毒素检查的品种不断增加，国内医药市场对鲎试剂的需求也将进一步增加。根据体外诊断鲎试剂相关行业研究报告：2014年全球热原检测的市场规模为4.62亿美元，预计未来5年的增长速度将达到12.23%的年均复合增长率，2019年全球热原检测市场规模将达到8.23亿美元。

使用历史

鲎是一种奇特的海洋生物。它的祖先在地质历史时期古生代就已出现，那时恐龙还不是地球的霸主，原始鱼类刚刚诞生。随著时间的推移，其他动物都在不断进化或者灭绝，只有鲎，4亿多年来保持著最原始的样貌，所以被人们称为“活化石”。对于人类来说，鲎的血液尤其重要。它们的血液中富含铜，所以呈现蓝色。在十九世纪五十年代，科学家们在鲎的灰蓝色血液Chemicalbook中发现了一种凝血剂，称为鲎试剂（Limulusamoebocytelysate,LAL），它可以与菌类、内毒素类物质发生反应，并在这些入侵物周围凝结出一层厚厚的凝胶。结果显而易见：它是一种检测药品和医疗用品中是否含有杂质的既简单又万无一失的方法。他们将鲎的血液提取出来并制成试剂，能够检测出含量低至万亿分之一的细菌和其他污染物。

应用

由于鲎试剂对细菌内毒素的特导性反应,所以它不仅用于药品的热原检查,而且也可用于临床和化验室的疾病诊断及卫生学上。

制备

1、将新鲜活鲎洗净，用75％的乙醇消毒，心门采血，加入抗凝剂，在10～15℃制得鲎血；2、在750～800转/分的速度下将鲎血离心分离，弃蓝色血清，将余下的白色细胞按体积比1∶4加入助悬洗涤剂，处理后，加入细胞破解剂，剧摇至血细胞完全破解，在0℃下存放获得细胞内溶物；3、加入体积比为1∶0.8～0.6的CHCl3，在2～5℃下剧摇，在2500转/分～3000转/分的速度下离心分离，收集细胞内溶物即鲎试剂原液，加入增敏剂，预检，再加至敏保护剂，分装，在零下45℃～55℃冻干，即得鲎试剂成品。

市场前景

由革兰氏阴性菌感染所引起的内毒素血症及脓毒血症目前仍是临床上的主要死亡原因之一。据文献报道：美国每年约有50万人患脓毒血症，其中约17.5万人因此而死亡，平均死亡率为35%。而在外科病人中的死亡率更可高达40%～70%。传统的革兰氏阴性菌感染诊断方法为细菌培养，不仅需时很长，而且由于抗生素的广泛使用，阳性率很低。而作为临床上抢救感染性休克的关键是在早期的数小时内，因此早期体液中内毒素的正确、快速检测及对症治疗就显得格外重要。鲎试剂准确定量临床生物材料(血液、尿液、腹水、胸水和脑脊液等)的内毒素水平，具有快速(检测时间小于1小时)、灵敏度高(可达0.01EU/ml)、抗干扰能力强和实验成本低等优点，可用于检测原因不明的发热、内毒素血症、败血症、脑膜Chemicalbook炎病人体液的内毒素含量，可以作为临床医生诊断病情和判断预后的辅助参考指标，也可作为指导临床治疗、判断疗效和筛选恰当药物的重要辅助手段，避免了目前临床上使用的传统的细菌培养上存在的检出率低、需要时间长的缺点。另外，近年来侵袭性真菌感染(InvasiveFungalDisease,IFD)的患病率呈明显上升。免疫缺陷病人常常伴有由主要致病菌和条件致病菌引起的真菌感染，败血病人和艾滋病人(AIDS)也常常伴有真菌感染，接受器官移植的病人和接受抑制免疫治疗的病人的院内感染也越来越多地发现是真菌感染。侵袭性真菌感染的发病率在1979年到2000年间升高了207%，致死率在1980年到1997年间则升高了407%。通常诊断侵袭性真菌感染是基于非特异的诊断法或放射学的技术，耗时长，特异性不高。由于确诊时间的拖延而造成治疗的不及时直接影响到病人死亡率的升高。研究表明：(1,3)-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的主要成分，在临床上出现明显症状之前，体液中的葡聚糖水平就已经明显升高。如果血浆中(1,3)-β-D-葡聚糖的水平高于80pg/ml，该病人就可能有侵袭性真菌感染。①真菌葡聚糖检测灵敏度高，特异性强，不受抗真菌治疗的影响，是早期诊断真菌、霉菌感染的最佳方法。基于鲎试剂中对(1,3)-β-D葡聚糖敏感的G因子旁路的真菌葡聚糖检测试剂盒在两小时之内即可检测出极微量的(1,3)-β-D葡聚糖浓度，可用于侵袭性真菌感染的早期诊断，对于不同病人群的确诊灵敏度可以达到70-100%。